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公司新闻


黄芪甲苷的新型提取方法研究

黄芪是豆科植物蒙古黄芪Astragalus memerana— ceus(Fisch.)Bunge var.mongholicus(Bunge)H siao或膜荚黄芪A.membranaeeus(Fisch.)Bunge的干燥根。 昧甘。性微温,具补气升阳,益卫固表、托疮生肌等功效,药用历史悠久、广泛。其化学成 分有多糖、皂苷、黄酮等。现代药理研究证明,黄芪多糖和黄芪皂苷为其中的主要成分,其 中皂苷以黄芪甲苷为主,有着广泛的药理作用。黄芪的有效成 分提取主要有醇提法和水提 法,黄芪类制剂多以水煮醇沉,取上清液部分或取醇沉部分,对药用资源的浪费比较严重。 黄芪多糖提取的方法多为水煮醇沉,得率和含量较低,精制过程繁琐且耗费大量有机溶剂。 黄芪皂苷类化合物粗提取有水煮醇沉 取上清液和醇提法,精制方法多先以醇类溶剂(如 乙 醇或甲醇等)提取,然后以正丁醇萃取。其法操作繁琐,且有机溶剂用量大。现将“液一液连 续萃取方法及装置”发明专利技术应用到黄芪化学成分黄芪甲苷提取中,提出一种新型提取 方法,为解决上述问题提供参考。

1 材料

日本岛津LC22010A高效液相色谱仪,自动进 样系统,CLASS2VPver.6.0色谱数据工作 站;SPSS 12.0软件包;黄芪药材由甘肃效灵生物开发有限责 任公司提供,并经兰州大学 药学院生药研究所马志 刚教授鉴定为豆科植物蒙古黄芪Astragalus mere— branaceus(Fisch)Bge.Var.mongholicus(Bge) Hsiao.;黄芪甲苷(中国药品生物制品检定 所,批号 0815-200406)。

2 黄芪甲苷含量测定

2.1 色谱条件 ODS-1色谱柱(4.6 mm×250 mm,5t~m)乙腈一水(2:1)洗脱,进样量10 L, 流速 1.0 mL·min~,检测波长200 nm,柱温25℃ 。
2.2 对照溶液制备精密称取干燥至恒重的黄芪甲苷对照品25 mg,置25 mI 量瓶中,加无 水乙醇 溶解至刻度,制成对照品溶液。
2.3 标准曲线的制作分别精密吸取对照品溶液 0.10,0.20,0.30,0.40 mL,分别加 入无水乙醇补 足至0.60 mL,各加入8 9,6香草醛无水乙醇试剂 0.50 mL,摇匀。缓缓 加入72 9/6硫酸5 mL,摇匀, 62。C水浴保温20 min。取出后迅速冷却至室温,于 538 nm波长处测定。得回归方程:A=一0.019 5 +0.020 2C,r=0.998 6(n=4),线性范围16.67"-- 66.67 m g·L~ 。
2.4 样品的测定精密称取黄芪提取物样品160 mg,加少量水溶解,定量转移至分液漏斗 中,用水 饱和的正丁醇萃取3次,每次10 mL。合并萃取 液,用正丁醇饱和的水10 mL 洗1次,减压浓缩至 干。以50 9,6甲醇一水20 mL溶解浓缩物,溶液以 0.5 mL·min 的 速度通过中性氧化铝柱(4 g,100 ~ 200目),并继续用50 甲醇一水溶液40 mL冲 柱。合 并通过液及洗液,减压浓缩至于,以无水乙 醇溶解并定容至25 mL量瓶中,精密吸取样品 滤液 0.25 mL,加无水乙醇补足至0.6 mL,按标准曲线 制备项下操作,测定样品。
2.5 精密度试验精密吸取上述对照品溶液,按标准曲线项下方法操作,连续重复测定5次, RSD 为1.28 9/6。
2.6 重复性试验取黄芪提取物粉末,共5份,每份约160 mg,精密称定,按样品溶液的 制备项下 处理并测定,该批样品黄芪甲苷含量为6.30 ,RSD为2.90。
2.7 加样回收率试验取上述已知含量的黄芪提 取物粉末,共6份,每份80 mg,精密称 定,每份各 精密加入对照品溶液(含黄芪甲苷0.500 4 rag),按 供试品溶液的制备项下处 理并测定,得平均回收率 为103.87 9/6,RSD为1.81。
2.8 稳定性试验 取黄芪提取物粉末1份约160 mg,精密称定,按样品溶液的制备项下处 理,分别 在0,8,16,24 h,1,2,3 d分别进样,记录峰面积,结 果RSD为2.88。

3 提取新方法研究

黄芪加95 乙醇在液一液连续萃取装置中提 取,提取液浓缩、真空干燥即得[5]。

3.1 药材对溶剂的吸附量将黄芪药材粉碎过20 目筛,取30 g,置于250 mL的盛有适量 95 乙醇的 烧杯中混匀,每0.5 h过滤得药渣称重。结果80 rain后质量不再增加,吸附量 达42.1 g,约是药材量 的1.4倍。因此3倍量的溶剂就可以保证药材与溶 剂充分接触, 使提取的化学成分容易在药材和溶剂 之间达到平衡。
3.2 黄芪甲苷在药材和溶剂中浓度达到平衡时的 时间确定取100 mL烧瓶3个,分别准确 称取10 g左右的黄芪,加入95 乙醇25 mL,在3()℃搅拌 回馏,30 rain后每10 min用移液 管取1 mL溶液, 并补加95 9/5乙醇1 mL。取出的溶液放冷至室温, 过滤,蒸除乙醇, 根据“2.4”项操作作为样品溶液测 定黄芪甲苷的含量,取3个平行试验的平均值。分 别在 40,5O,60,70℃下同法操作。结果如图1。由 图可知,50℃ 效率较高,平衡时间大约在 4()~61) min之间,平衡时溶剂中质量浓度大约在0.1 g·L 左右。
3.3 提取新方法的醇提工艺正交实验设计 在醇 提工艺中主要影响因素就是溶剂循环次数 和温度,前者可以取决于浓缩子系统的蒸馏速度(溶剂循环 周期数)和时间。根据“3.2”结 果可以比较合理安排 正交试验的因素和水平,见表1。
取100 mL烧瓶9个,分别准确称取10 g左右 的黄芪,加人25 mL 95 9/6乙醇,放入磁 子,安装到 液一液连续萃取装置上l_5]。分别根据正交试验设计 进行提取,提取完毕,蒸 除溶剂。60℃ 真空干燥至 恒重。根据“2.4”项下样品溶液操作,测定黄芪甲苷 含量(每1 g原药材所含的总黄酮量)。结果见表2。
3.4 方差分析结果表2直观分析,黄芪甲苷含量 的极差数据R,,>Rn>R.、,各因素作 用主次为B>D >A,A!B 较佳。综合方差分析结果可看出(表 3),因素B、D的P<().()5.对 黄芪甲苷含量的影响 有统计学意义;而 素A的P>().()5,对含量的影 响无统计学意义。 rh此为减少能源消耗,降低生产 成本。最佳提取条件的搭配应为A. I)2,即溶剂循 环3 个周期。提取温度4()℃ ,蒸馏时间3 h。
醇提最佳T艺的验证:按A, D 最佳条件提 取,测定黄芪甲苷含量为2.523 5 mg·g ( =5, RSD = 7.4 )

4 讨论

“液一液连续萃取方法及装置”发明专利是一种新颖的提取方法,是对现有提取理论和方法 新颖组合、优化。与传统方法比较,提取理论并未改变,不同点在于对现有理论、技术应用 的重组改造。所以生产工艺控制关键技术参数与传统工艺有较大差异:(1)确定药材对溶剂 的吸附量:提取子系统通过溶剂循环周期控制浓度梯度,无需加大溶剂体积,只要维持溶剂 与药材的充分接触就可以。所以确定药材的溶剂吸附量,一方面用来估算生产能力,另一方 面确定工艺研究中估算溶剂循环周期数范围。 (2)提取物在药材和溶剂中浓度达到平衡的时 间:对于某种药材,使用特定溶剂,在一定的搅拌速度、提取温度下,被提取物在药材和溶 剂中浓度梯度变化 速度也一定。所以必须考查提取物在药材和溶剂中浓度达到平衡最短时 间。基于这些数据来试验工艺控制关键技术参数中的提取时间。(3)确定提取温度;对于某 种药材,使用特定的溶剂,在一定的搅拌速度下,被提取物在药材和溶剂中浓度梯度变化速 度受温度影响,从而直接影响提取效率与速度。因此,通过考查提取温度、药材的溶剂吸附 量和提取物 在药材和溶剂中浓度达到平衡的时间,选择优化工艺的影响因素水平。
根据文献报道,传统方法提取黄芪甲苷,含量在0.047~1.862 mg·g (以原药材计算),利 用本文方法提取黄芪甲苷,含量为2.523 5 mg·g~ ,收率上升。本结果表明,新工艺生 产周期短、操作简 便、环境污染较小、产品质量、品质明显高,具有一定的应用前景。