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CAMG薄层扫描法测定不同产地黄芪中黄芪甲苷的含

黄芪为豆科植物蒙古黄芪

Astragalus memerana— ceus(Fisch.)Bunge var.mongholicus(Bunge)H siao或膜荚黄芪 A.membranaeeus(Fisch.)Bunge的干燥根,主要含有皂苷类、多糖、氨基酸和微量元素 等¨。黄芪皂苷是黄芪药效物质基础的重要组成之一,其中黄芪甲苷(ASI)为活性指标成分, 具有抗衰老、调节免疫功能、保护心肌和大脑缺血等作用。目前市售黄芪药材多为栽培,而 野生较少,因此不同来源药材之间黄芪甲苷含量有较显著的差异,从而影响药材的质量。曾 使用高效液相色谱一紫外检测法测定黄芪甲苷含量,但由于其仅在200 nm处有弱的末端吸 收,因而操作条件十分严格,噪音对结果影响较大,灵敏度也较差,而CAMG薄层扫描法 不受紫外下无吸收成分的影响,且重现性好,是一种良好的黄芪甲苷含量测定方法,本实验 采用该法对不同产地黄芪中黄芪甲苷含量进行测定,为黄芪药材质量控制提供实验依据。

1 仪器、试剂与样品

仪器:瑞士CAMAG TLC Scanner,CAMAG半自动点样仪。
试剂与样品:硅胶G薄层预制板(青岛海洋化工厂),黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定 所 0781—20008);其余所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 供试品的制备精密称取本品内容物6.2375 g,置圆底烧瓶中,加入甲醇60 ml,80℃ 回流提取4 小时,滤过,残渣同法提取2小时,滤过,合并滤液,滤液水浴蒸干,残渣加 水20 ml使溶解,水溶液用水饱和的正丁醇萃取4次(30、30、20、20 m1),合并正丁醇液, 然后用氨试液洗涤2次(20、20 m1),再用正丁醇饱和的水萃取2次(20、20 m1),正丁醇挥 干,残渣用甲醇定容至10 ml,作为供试品。

2.2 对照品的制备 精密称取黄芪甲苷对照品 10.10 mg,配成25 ml,作为对照品溶液。

2.3 色谱分析条件展开条件:氯仿-甲醇一水(26: 12:4)的下层液。喷以10%硫酸乙醇, 105 qc显色5 ~ 7分钟。反射法锯齿型单波长薄层扫描, =536 nm,扫描速度,10 nm/ step,分辨率,25 Ixm。

2.4 空白试验取不含黄芪的阴性样品,按样品溶液制备供试品,测定,结果空白无干扰。

2.5 标准曲线的制备精密吸取对照品溶液2、4、 6、8、10 l,分别点于同一个硅胶G板上, 展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液显色后进行测定,以峰面积积分值l,为纵坐标, 以点样量( g) 为横坐标作标准曲线:Y=18 511+9 083X,r=0.999 1。说明黄芪甲苷在0.8~ 4.8 I.zg范围内线性关系良好

2.6 稳定性实验对同一个对照品斑点,分别在 0、30、60、90、120、150、180分钟扫描 一次,连续7 次。样品稳定性RSD=0.79% :标准品稳定性:RSD = 0.87% 。说明本品 在3小时内稳定。

2.7 精密度试验

① 同点精密度(仪器精密度)对同一斑点连续扫描5次,分别测定峰面积,RSD为 0.72%。
② 同板精密度取样品溶液,在同一薄层板上点样5次,分别测定峰面积,RSD为1.95%。
③ 异板精密度在5块不同板上点同样量同一浓度的对照品,测定其峰面积,RSD为2.52%。

2.8 重现性实验吸取6份供试品溶液4 l,分别点于同一硅胶G薄层板上,依法测定含量,RSD为3.13%。

2.9 回收率试验见表1。

2.10 样品的测定取不同产地的药材,按照供试品液制备项下方法操作,得供试品溶液,分 别精密吸取供试品溶液2 Ixl,按照上述条件分析测定,结果见表2。

3 讨论

笔者曾经按《中国药典}2005年版中黄芪药材中黄芪甲苷的提取、纯化方法,但比较繁琐, 用 HPLC的方法进行了黄芪甲苷的含量测定,结果噪声比较大,测出的结果重现性差,因 此本研究对样品制备方法进行了改进,不使用D101大孔树脂进行分离,反而黄芪甲苷的含 量要高出10%左右,说明用大孔树脂进行分离过程中会使一部分有效成分损失。因此本研 究采用改进后方法对不同产地的黄芪进行考察,简化了药材的前处理过程,使得药材的分析 速度加快,同时也减少黄芪甲苷的损失。通过对不同产地黄芪中黄芪甲苷的含量进行比较, 结果表明不同产地黄芪中黄芪甲苷的含量有一定的差异,其中甘肃产黄芪平均质量较优。